產(chǎn)品背景：

Caspase全稱為含半胱的天冬蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase)。caspase是一類(lèi)蛋白酶家族，成員較多，在人類(lèi)，已經(jīng)鑒定了11種不同的caspase，根據(jù)其蛋白酶序列的同源性可分為3個(gè)亞族：Caspase-1亞族包括 Caspase-1、4、5、11；Caspase-2亞族包括Caspase-2、9； Caspase-3亞族包括Caspase-3、6、7、8、10。起細(xì)胞凋亡執(zhí)行者作用的是caspase3,6,7。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

更簡(jiǎn)單：無(wú)需抗原抗體反應(yīng)，基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測(cè)方法簡(jiǎn)單高效，反應(yīng)僅需要幾分鐘。

更靈敏：無(wú)需抗體，檢測(cè)染料僅BrdU抗體的1/500，很容易擴(kuò)散，即便是單個(gè)增殖細(xì)胞也能準(zhǔn)確檢測(cè)。

更快速：無(wú)需過(guò)夜，省卻了抗原抗體反應(yīng)的復(fù)雜繁瑣步驟，完成整個(gè)檢測(cè)周期僅需2.5小時(shí)。

更準(zhǔn)確：無(wú)需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免變性帶來(lái)的樣品損傷，確保細(xì)胞核邊緣清晰完整。

更兼容：對(duì)樣品幾乎無(wú)損傷，更容易與多種抗體或熒光蛋白同時(shí)標(biāo)記，能夠同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞其他性狀特征

實(shí)驗(yàn)步驟：

1.細(xì)胞培養(yǎng)

（以6孔板為參考，其他培養(yǎng)孔可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。）每孔1x10^5-3x10^6細(xì)胞接種于6孔板中，培養(yǎng)至正常生長(zhǎng)階段。

注：細(xì)胞接種量，可根據(jù)細(xì)胞大小、生長(zhǎng)速度、以及實(shí)驗(yàn)處理周期等調(diào)整。

2.細(xì)胞干預(yù)或者處理

（選做）可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行藥物或者其他刺激干預(yù)處理。

3.細(xì)胞共孵育培養(yǎng)

根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，用細(xì)胞培養(yǎng)基按比例稀釋溶液，或者按比例在孔板培養(yǎng)液中加入適量的溶液與細(xì)胞共同孵育，同時(shí)設(shè)置不添加組作為陰性對(duì)照組。每孔加入配制的稀釋后的培養(yǎng)液共同孵育2h，去除舊培養(yǎng)液。

注意事項(xiàng)：

1.由于使用96孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果你的細(xì)胞要養(yǎng)48 h或更長(zhǎng)，建議不要吝嗇96-孔板的四周邊孔，這32個(gè)邊孔不能使用，建議加入滅菌PBS以飽和中間64個(gè)孔的水分。因?yàn)榧?xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，邊孔的水分蒸發(fā)很快，培養(yǎng)液及里面的藥物會(huì)出現(xiàn)濃縮現(xiàn)象，細(xì)胞的狀況就復(fù)雜了。

2.溶劑在低溫情況下會(huì)凝固，使用前請(qǐng)室溫放置或20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

3.一般4oC避光保存兩周內(nèi)有效，保存在-20度長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融，小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解，尤其當(dāng)變?yōu)榛揖G色時(shí)就不能再用了。

4.Formazan溶解液結(jié)凍或產(chǎn)生沉淀時(shí)可以37℃水浴孵育以促進(jìn)溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。

5.孵育時(shí)，須避光。

6.有致癌性，用的時(shí)候小心，有條件帶那種透明的簿膜手套。配成的需要無(wú)菌，對(duì)菌很敏感。

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